培養細胞基本形態
培養細胞zui常見的是貼附于平面支持物細胞。在一般光鏡下生存中的細胞是均質而透明的,結構不明顯。細胞在生長期常有1-2 個核仁。在細胞機能狀態不良時,細胞輪廓會增強,反差增大。若胞質中時而出現顆粒、脫滴和腔泡等,表明細胞代謝不良。體外培養細胞根據它們在培養器皿是否能貼附于支持物上生長特征,可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細胞在培養時能貼附在支持物表面生長。如羊水細胞為貼附型細胞,常表現為成纖維型細胞和上皮細胞生長。懸浮型細胞在培養中懸浮生長。
哺乳動物細胞冷凍保存
主要目的:
(1)保存種子細胞,以便隨時取用。這是保存細胞的zui主要目的。
(2)減少細胞被微生物污染的危險性。
(3)減少細胞之間交叉污染的危險性。
(4)減少細胞因傳代培養而引起的遺傳變異和形態改變。
(5)避免有限細胞系出現衰老或惡性轉化。
(6) 降低人力和物力。
冷凍保存細胞的解凍與復蘇要點:慢凍快融
(1)快速解凍。凍存細胞從液氮中取出后,應立即放入 37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在 1 分鐘內全部融化(不要超過 3 分鐘)。
(2)解凍操作過程動作要輕。由于冷凍保存過的細胞變得非常脆弱,不僅解凍速度要快,而且動作要輕。一般情況下,解凍后的細胞可直接接種到含*生長培養液的細胞培養瓶中直接進行培養(1ml 凍存細胞液加入到 25-30ml 新鮮*培養液中),24 小時后再用新鮮*培養替換舊培養液,以去除 DMSO。如果,細胞對冷凍保護劑特別敏感,那么,解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含*生長培養液的培養瓶中。
特別注意:
(1)解凍時務必注意安全,預防冷凍管爆裂。,要帶手套,用鑷子將細胞冷凍管從液氮中取出,放入 37℃水浴中。切不可直接用手,以免凍傷。
(2)冷凍管在水浴中解凍時,要將凍存管蓋子擰緊,確定擰緊后再投入水浴鍋中,注意液面不可超過凍存管蓋面,否則,易發生污染。