近期恒遠經常接到客戶的:同一條件下,除了測的指標不一樣,為什么有張膜顯影,有張未顯影???
上海恒遠技術分析:在同一條件下,如果一張膜顯影,一張膜未顯影,可以逐一查找原因:
1、你是否兩張膜上都設有陽性對照?如果有,一張膜有信號,一張沒信號,可能是操作過程中有問題(可能原因是(1)、你結合底物會不會有問題,即沒有充分結合好,或者結合時間太短,(2)、你要確定兩張膜都是用新的底物反應液,(3)、就是沒有信號的膜會不會壓片時間太短,如果使用儀器掃片就不存在這種問題,)所以原因比較多,你只能逐一排查。
2、如果沒有設對照,這個問題就更復雜,而且解決起來也不科學。同時,要控制兩個膜條件*一樣是很困難的。即使你是同時做的兩個,那一定有一個先上樣,一個后上樣,而且你跑膠的時候會發現,兩塊膠上的條帶速度肯定是不一樣的,轉膜兩個膜放的位置也肯定不一樣,等等,也許這些小問題都不能導致你壓片不出條帶,我只是想說,兩個條件不可能*相同,western blot實驗就是重復性比較差,所以一個出一個不出,這樣是正常的。