不同的細胞,喜歡的環境是不一樣的。這個不僅僅是說培養基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數量多一點比較好生長,生長狀態也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點細胞狀態會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。
對于有些人總是會遇到養的細胞形態怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態不好,(或者細胞形態不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:
首先,倒掉舊的培養基,加入 3 ml 新的培養基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入 3 ml 的培養基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。
其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養瓶內,培養瓶事先加入培養基,放入培養箱內培養,按時間點觀察細胞貼壁情況。10 分鐘觀察一次,20 分鐘,30 分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養基,加入 3 ml 新培養基再輕輕洗一次。然后加入*培養基培養。后續觀察細胞生長情況以及形態。
如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞形態。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。